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Morris水迷宮實驗對好忘方改善AD模型小鼠認知障礙及機制研究
點擊次數:2260 更新時間:2020-05-06

摘要

阿爾茨海默病AD)又名老年性癡呆,是一種以進行性認知損害和個性改 變為特征的神經退行性疾病。其病發群體主要是老年人。隨著社會老齡化的加劇, 阿爾茲海默病逐漸成為威脅人類健康的主要疾病之一W然而,由于現有主流治 療藥物治療效果不理想,且具有肝毒性等副作用,尋找更安全、有效的藥物成為 AD治療的迫切需求。中藥由于其多靶點、副作用小等特性受到越來越多的關注。 從中醫角度,AD為本虛標實的疾病,而多見腎虛髓虧為本、痰蒙腦竅為標。補 腎、化痰是中醫治療AD的重要治法。好忘方出自于《備急千金要方》,是唐代 著名醫家孫思邈補腎、化痰并用,用于治療健忘的經典方劑,但關于其應用于 AD的治療研究還相對缺乏。

目的:探究好忘方對AD模型動物認知障礙的改善作用及其潛在的分子生物學機 制。

方法:

  • 使用東莨宕堿誘導ICR小鼠認知損害,在AD急性模型上初步評估好忘方 對AD模型小鼠認知障礙的改善作用。
  • 使用SAMP8小鼠探究好忘方對AD自發模型動物的認知改善效果、特點, 并從PKA-GSK3P-TAUPKA-CREB通路探討好忘方改善AD模型小鼠的分子 生物學機制。
  • 使用ICR小鼠探究PKA對好忘方治療AD模型小鼠認知障礙及提高正常 小鼠認知能力的重要性。

結果:

東莨宕堿模型下,與空白對照組相比,模型對照組Morris水迷宮逃避潛 伏期顯著增長,穿越次數明顯下降,呈現出明顯認知障礙。好忘方和多奈哌齊給 藥一周治療均可顯著提升造模小鼠Morris水迷宮站臺穿越次數。

SAMP8模型下,與空白對照組相比,SAMP8小鼠在Morris水迷宮逃避 潛伏期、站臺穿越次數、目標象限路程比和新物體識別中均呈現認知損害表型。 給藥2周,好忘方在提高Morris水迷宮站臺穿越次數、目標象限路程比上己顯

示出治療效果,且顯著上調了 SAMP8小鼠海馬區PKA蛋白表達。多奈哌齊此 時尚未起效;給藥3周,好忘方和多奈哌齊皆可縮短SAMP8小鼠Morris水迷宮 潛伏期,提高站臺穿越次數及新物體識別指數。此外,好忘方可提高SAMP8小 鼠Morris水迷宮目標象限路程比,并在縮短逃避潛伏期方面優于多奈哌齊。 Western Blot結果顯示,好忘方和多奈哌齊皆可顯著逆轉SAMP8小鼠海馬區 PKA-GSK3p_TAU通路蛋白水平,上調PKA-CREB及其下游BDNFSYNAPSIN1GluRlPSD95蛋白表達給藥3周,停藥1周后,Morris水迷宮 和新物體識別測試中,好忘方給藥3周的治療效果并未減退,而多奈哌齊只在縮 短小鼠Morris水迷宮潛伏期方面依然有效。此外,好忘方仍可上調SAMP8小鼠 海馬區PKA蛋白水平,多奈哌齊對PKA的調節作用己失效,且好忘方組PKA 蛋白水平明顯高于多奈哌齊組。

(1)東莨宕堿模型下,PKA阻斷劑H89顯著逆轉了好忘方對造模小鼠站臺 穿越次數的提升作用,阻斷了好忘方對磷酸化TAU的下調作用。

(2)未造模條件下,好忘方給藥顯著提高了正常小鼠水迷宮站臺穿越次數及 Y迷宮新奇臂時間比,上調了小鼠海馬區PKACREBPSD95的蛋白表達。給 與H89阻斷PKA后,上述改善效果均消失或被顯著逆轉。

結論:好忘方可改善AD東莨宕堿模型及SAMP8模型小鼠認知障礙。

好忘方的認知改善作用與PKA-GSK3P-TAU介導的磷酸化TAU的清除及 PKA-CREB介導的突觸可塑性的增強作用密切相關。

好忘方對AD模型小鼠認知障礙的改善作用及對正常小鼠認知功能的增 強作用均依賴于PKA的激活。

關鍵詞:好忘方;阿爾茲海默病;補腎化痰;PKA;磷酸化TAU;突觸可塑性

 

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